奧林巴斯顯微鏡照明光路系統(tǒng)調(diào)整方法

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為了使奧林巴斯顯微鏡的視野能受到均勻而又充分的照明，在奧林巴斯顯微鏡初次安裝和調(diào)試時(shí)，就必須把照明光路系統(tǒng)調(diào)整好，這是正確使用奧林巴斯顯微鏡，并獲得正確結(jié)果的重要手段和較為基本的要求。

奧林巴斯顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調(diào)整主要有以下4項(xiàng)內(nèi)容: 

(1) 照明光源燈室在顯微外的初步調(diào)整
　?、?首先將燈室的外殼打開(kāi)，壓彈簧夾子將鹵素?zé)襞菅b入插座中，安裝時(shí)避免手指直接接觸燈泡(可用柔軟的布或紙隔住)，以免燈泡上留有指紋等臟物，影響燈泡的使用壽命。
　?、?把燈室擺在桌面上，接通電源后，用的螺絲刀調(diào)節(jié)燈的調(diào)焦旋鈕孔(標(biāo)有"←→")，使燈絲投影在1-2m外的墻上，將燈絲成像調(diào)至清晰；然后調(diào)節(jié)燈的高低位置調(diào)節(jié)絲孔(標(biāo)有"──")，使燈絲位置高低適當(dāng)；再調(diào)節(jié)燈的左右位置調(diào)節(jié)螺絲孔(標(biāo)有"──")，使燈絲左右位置合適。

(2) 光源發(fā)光體(燈絲)在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的檢驗(yàn)和校正：
   　目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調(diào)入物鏡的視域范圍內(nèi)，從光源的角度去確保奧林巴斯顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明，這是調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的前提條件。需要的基本工具:對(duì)中望遠(yuǎn)鏡購(gòu)置奧林巴斯顯微鏡時(shí)已配備。
　　① 拔掉燈庫(kù)內(nèi)的毛玻璃套筒，把燈室裝回奧林巴斯顯微鏡上；
　?、?選用10×物鏡，開(kāi)亮光源程序找樣品并調(diào)焦清晰，再換用40×物鏡把樣品調(diào)焦清 晰(40×物鏡可以看清燈絲的全貌)；
　　③ 把聚光鏡的孔徑光闌和視場(chǎng)光闌均開(kāi)到較為大；
　　④ 拔掉其中一個(gè)目鏡，換上對(duì)中望遠(yuǎn)鏡，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡，就可在視野中看到燈絲像；
　?、?如燈絲位置不合適，調(diào)"──"孔，把燈絲像沿水平方向調(diào)好，調(diào)"──"孔，把絲像沿垂直方向調(diào)好，直至將燈絲像調(diào)至剛好充滿(mǎn)物鏡孔徑的光圓像；
　?、?調(diào)整完畢后，將毛玻璃套筒插回原位，拔掉對(duì)中望遠(yuǎn)鏡，換回目鏡作下一步調(diào)整。以上所述照明光源燈室在奧林巴斯顯微鏡外的調(diào)整和光源發(fā)光體在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的校驗(yàn)，只需在奧林巴斯顯微鏡初次安裝調(diào)試及更換燈泡時(shí)進(jìn)行，平時(shí)使用奧林巴斯顯微鏡時(shí)不能隨意亂調(diào)亂動(dòng)。萬(wàn)一調(diào)亂時(shí)，可按上述步驟調(diào)回原狀。

(3) 庫(kù)勒照明(Kohler)系統(tǒng)的正確調(diào)整：
奧林巴斯顯微鏡的正確調(diào)試，主要工作之一是照明光路系統(tǒng)的調(diào)整，而其中的關(guān)鍵是庫(kù)勒照明系統(tǒng)的調(diào)整。對(duì)于每一位使用奧林巴斯顯微鏡的人員，特別是作顯微照像的人員來(lái)說(shuō)，應(yīng)該對(duì)庫(kù)勒照明系統(tǒng)的原理及其調(diào)整步驟有一定的了解和掌握，才能充分發(fā)揮奧林巴斯顯微鏡應(yīng)有的功能，拍出來(lái)的照片才能在效果上比較一致而又完善。庫(kù)勒照明系統(tǒng)的原理簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是:光源發(fā)光體上任意一點(diǎn)發(fā)出的光，可以照明奧林巴斯顯微鏡的視域范圍，而光源發(fā)光體上每一點(diǎn)所發(fā)出的光匯集起來(lái)，在奧林巴斯顯微鏡的視域中就實(shí)現(xiàn)了非常充分而又均勻的照明。調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的目的，是為了使所觀察的視域能獲得均勻而又充分的照明，防止雜散光對(duì)照像系統(tǒng)造成影響或干擾，以免照像時(shí)在底片形成灰霧。高調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的必要部件:視場(chǎng)光闌、可進(jìn)行合軸調(diào)整的聚光鏡系統(tǒng)。
　　① 選用10×物鏡和10×目鏡；
　　② 把聚光鏡前端透鏡擺進(jìn)光路中，孔徑光闌調(diào)至適中的位置上(不大不小)，再把聚光鏡升到較為頂?shù)奈恢蒙希酃忡R轉(zhuǎn)盤(pán)調(diào)至明視野"J"位置；
　?、?把視場(chǎng)光闌調(diào)至較為小(0。1)；
　?、?載物臺(tái)上放上已封片的生物樣品，開(kāi)亮光源，調(diào)焦清晰；
　?、?視域中會(huì)出現(xiàn)一個(gè)局部照明的區(qū)域或亮斑，這是視場(chǎng)光闌的模糊像，在其中可以清晰地看到樣品的細(xì)節(jié)；在它之外是較暗的視域，不一定能把樣品的細(xì)節(jié)看得清楚；
　?、?把聚光鏡微微地向下調(diào)，使視野中的亮斑逐漸收小，慢慢變成一個(gè)清晰的多邊形象，這便是視場(chǎng)光闌的清晰像；
　?、?一般情況下，多邊形象并不在視域中央，需要調(diào)整聚光鏡的一對(duì)調(diào)中螺絲，把視場(chǎng)光闌多邊形的像調(diào)至中央位置；
　?、?逐漸開(kāi)大視場(chǎng)光闌，使多邊形象成為視域的內(nèi)接多邊形，進(jìn)一步核對(duì)調(diào)中的狀況，如對(duì)中不夠理想，繼續(xù)微微調(diào)對(duì)中螺絲；
　　⑨ 將視場(chǎng)光闌稍為再微微開(kāi)大一些，使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上，至此，庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整完畢。 

(4) 孔徑光闌的正確使用：　
由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響奧林巴斯顯微鏡的分辨率，使用時(shí)應(yīng)掌握正確的使用方法。過(guò)去由于對(duì)孔徑光闌的認(rèn)識(shí)不足，往往把它當(dāng)作是調(diào)節(jié)視野亮度的工具。雖然調(diào)節(jié)孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度，但會(huì)直接影響成像的反差、對(duì)比度及分辨率，在使用過(guò)程中應(yīng)盡可能避免。為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用，以便在觀察時(shí)，尤其在作顯微照相時(shí)獲得較為佳分辨率，在每換用一個(gè)倍數(shù)的物鏡時(shí)，在樣品調(diào)焦清晰后，需要調(diào)節(jié)孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑(物鏡孔徑像)的2/3 。調(diào)整方法是用對(duì)中望遠(yuǎn)鏡對(duì)焦于視野中黑色相差環(huán)上，調(diào)節(jié)孔徑光闌，可以看到一個(gè)多邊形的孔徑光闌像，然后調(diào)到等于物鏡孔徑像的2/3，即介于黑色相差環(huán)外與圓形視域內(nèi)之間。為方便起見(jiàn)，可把與各倍數(shù)物鏡相對(duì)應(yīng)的孔徑光闌預(yù)先調(diào)整好，并作好標(biāo)記，以免每次使用都要重新調(diào)整。

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