熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意幾點(diǎn)

更新時間：2019-04-21

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高通量的96孔PCR板和8聯(lián)管是在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中，主要作為參與擴(kuò)增反應(yīng)的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。醫(yī)療級聚丙烯（PP）材質(zhì)因其的純凈度和穩(wěn)定性，能更好適應(yīng)PCR反應(yīng)過程中反復(fù)高低溫設(shè)定，并且能夠?qū)崿F(xiàn)高溫高壓滅菌操作，常常被用于PCR耗材的生產(chǎn)。隨著熒光定量PCR技術(shù)的普及，該技術(shù)被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫(yī)藥等領(lǐng)域，不僅應(yīng)用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA，RNA的研究領(lǐng)域。

如何正確使用96孔PCR孔板

PCR板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR儀（如伯樂CFX系列，ABI 7500fast 以上型號， Roche 480系列），但如果熒光定量PCR儀是底部光源的，則應(yīng)選擇透明的。
PCR板根據(jù)裙邊設(shè)計(jì)又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設(shè)計(jì)模式，不同廠家的熒光定量PCR儀會設(shè)計(jì)不同的切角或邊緣凸起，請選擇適合該P(yáng)CR儀的板子。
PCR板又分100ul體積（矮板）和200ul體積（高板），根據(jù)機(jī)型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯誤對機(jī)器造成破壞和加熱不均導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真。
當(dāng)使用96孔板做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)的時候，推薦使用光學(xué)膜代來密封反應(yīng)孔。正確的封膜方法是：先沿著96孔板的縱向壓膜，然后橫向，后沿著板的邊緣按壓使之密封。具體手法見下面圖示：

加樣后會在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應(yīng)體系內(nèi)也會有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用的微孔板離心機(jī)解決上述問題。

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