PCR儀的使用和日常維護

更新時間：2021-02-05

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PCR儀的使用方法

1.1.1.1 操作步驟

(1) 開機：打開開關，視窗上顯示“SELF TEST”，顯示10秒中后，顯示RUN-ENTER菜單：準備執(zhí)行程序。

(2) 放入樣本管，關緊蓋子。

1.1.1.2 程序輸入與選擇

(1) 如果要運行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲存的程序，按《Proceed》，則屏幕顯示：按《Proceed》選擇ENABLE，則開始執(zhí)行程序。

(2) 輸入新的程序：

在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM，按《Proceed》選擇NEW，命名新的程序，多8個字母，輸入后按《Proceed》確認(如何輸入字母、數(shù)字)；輸入程序步驟：名字輸入后，顯示，按《Proceed》則可以輸入溫度(0～100℃)，按《Proceed》確認后，則可以輸入孵育時間，用《Select》鍵移動光標，輸入數(shù)字，完成后按《Proceed》確認，跳到下一步，輸入方式同上；選擇GOTO，輸入循環(huán)步驟時鏈接到第幾步(循環(huán)數(shù)多可達9999次)(為實際循環(huán)數(shù)-1)。

選擇option,顯示：再選擇increment,按《Proceed》確認，輸入初始的溫度，確認后輸入時間，按《Proceed》確認，然后輸入每個循環(huán)增加或減少的溫度，增加用正值，減少用負值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》確認。

選擇extend，按《Proceed》確認,輸入每個循環(huán)增加或減少的時間(-60～60秒)，按《Proceed》確認；選擇slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》確認，然后輸入加熱或致冷的速度，按《Proceed》確認；選擇End，輸入結(jié)束步驟。

(3) 輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運行。

(4) 其它：用《pause》可以暫停一個運行的程序，再按一次繼續(xù)

程序；用《stop》或《Cancel》可停止運行的程序。

(5) 編輯程序：

可以用《Cancel》鍵刪除輸錯的值，輸入新的值后按《Proceed》確認。對于未輸完的程序，要先輸入END，按《Proceed》將程序儲存后才能刪除。刪除已經(jīng)儲存的程序：從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇DELET,用《Select》選擇刪除。

(6) 查看程序的步驟：在主菜單上選擇LIST，按《Proceed》，用《Select》將選擇名稱，再按《Proceed》，顯示程序的一步，用《Select》鍵向前、向后翻頁查看，此時不能改變程序的值。

(7) 編輯已有的程序：

從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇EDIT，按《Proceed》確認，用《Select》鍵選擇要編輯的程序，按《Proceed》顯示程序的一步。用《Select》鍵將光標移到要改變的溫度或循環(huán)的值上，鍵入新值，按《Proceed》確認，按《Cancel》刪除鍵入的值，出現(xiàn)空格，鍵入新值后確認。注：一旦值被改變或刪除，原來的值不能恢復，必須重新鍵入。編輯時間值：必須重新鍵入小時、分鐘、秒，按《Proceed》。

1.1.1.3 PCR體系設置

如何設置一個PCR體系：一般分為8步：

(1) 預變性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

(2) 變性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

(3) 退火：溫度自定，30s~2min。

(4) 延伸：70～75℃，一般72℃，對于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。

(5) 循環(huán)數(shù)：一般25～35個循環(huán)。

(6) 終延伸：72℃，5～15min。

(7) 保存：10℃，時間設為0。

(8) END。

1.1.2 PCR儀使用中的一些小技巧

(1) 仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發(fā)揮儀器的性能并避免發(fā)生錯誤。

(2) 程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失。

(3) 常用的程序調(diào)用以前使用過的正確程序文件；樣品量較小時，在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯(lián)管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好，有利于效果的穩(wěn)定性。

(4) 在進行各種試劑加樣時，相同的試劑要一起加后再分裝，要用同一只吸液器及同一個槍頭。

(5) 加樣完成后，用酶聯(lián)板離心轉(zhuǎn)頭將管離心一下，使反應液到管底，因為反應液在管壁或管蓋上時，會嚴重影響實驗結(jié)果。

1.1.3 PCR儀的維護和保養(yǎng)

PCR儀器不是一種計量儀器，其主要作用原理與基本計量要素密切相關，要求較高，一旦失控，儀器將不能正常工作，所以PCR儀器也需要定期檢測和維護，這對依賴自然風降溫的PCR儀器尤為重要。下面介紹一些具體的保養(yǎng)維護方法：

1.1.3.1 PCR儀的清洗

(1) 樣品池的清洗：先打開蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開PCR儀，設定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5～10min即可。

(2) 熱蓋的清洗：對于熒光定量PCR儀，當有熒光污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來自樣品池時，或當有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔干凈，無污物阻擋光路。

(3) 儀器外表面的清洗：清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進行清洗。

(4) 更換保險絲：先將PCR儀關機，拔去插頭，打開電源插口旁邊的保險盒，換上備用的保險絲，觀察是否恢復正常。

1.1.3.2 PCR儀的維護

(1) PCR儀器需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。

(2) PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的，當檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1～2℃時，可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。

(3) PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制，要求越短越好，當PCR儀的降溫過程超過60s，就應該檢查儀器的制冷系統(tǒng)，對風冷制冷的PCR儀要較*地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統(tǒng)應檢查相關的制冷部件。

(4) 一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時，不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件，必要時要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。