酶標儀也被稱為微孔板檢測儀，是生命科學研究實驗室的重要工具。

傳統(tǒng)的酶標儀是指具備吸收光檢測功能的酶聯(lián)免疫檢測儀，后來隨著檢測方式的發(fā)展，在吸收光檢測基礎上增加了熒光和發(fā)光檢測，因此，我們把具有兩種及兩種以上檢測功能的酶標儀稱為多功能酶標儀，也叫做多功能微孔板檢測儀，目前廣泛應用于臨床檢驗、生物學研究、農業(yè)科學、食品和環(huán)境科學研究中。

十年技術支持的經驗來簡單粗暴地談一談多功能酶標儀以及它能實現的功能，希望能為研究者在選擇酶標儀的時候提供一定的參考。
 

多功能酶標儀的應用

多功能酶標儀通常包括紫外-可見吸收光、熒光強度及發(fā)光三種檢測模式，熒光檢測還包括高級熒光應用。因此一臺全面的多功能酶標儀能夠提供的檢測模式可以包括：

1、吸收光檢測（Absorbance）：
使用單色器或者濾光片系統(tǒng)來發(fā)射和檢測特定波長，檢測的是物質本身，不同的物質有不同的吸收光波長，對波長選擇靈活性要求較高。
典型應用：ELISA 以及 DNA/RNA 純度檢測

2、熒光強度（Fluorescence Intensity，FI）：
采用特定波長激發(fā)光來激發(fā)樣品孔內的熒光標志物，通過檢測器檢測熒光物質被激發(fā)產生的發(fā)生光。因為熒光分子被激發(fā)后電子會發(fā)生能量躍遷，當電子回落時產生發(fā)射光，因此發(fā)射光的波長會比激發(fā)光的波長更長（能量更低），比如常用的 GFP 的最佳激發(fā)波長是 488nm ，最佳發(fā)射光檢測波長是 510nm 。

熒光強度還有一個衍生實驗，那就是熒光共振能量轉移（Fluorescence Resonance Energy Transfer，FRET），使用兩種熒光分子分別作為供體和受體去標記兩個生物分子，如果兩個生物分子足夠接近，那么供體熒光分子的激發(fā)能誘發(fā)受體熒光分子發(fā)出熒光信號。FRET 通常用來檢測生物大分子相互作用。值得注意的是，選用的供體熒光分子發(fā)射光波長范圍需要與受體熒光分子的激發(fā)光波長重疊。

3、發(fā)光檢測（Luminescence）：
包括化學發(fā)光和生物發(fā)光，是樣本孔內發(fā)生的化學、生化或者酶反應發(fā)出的光信號。與吸收光和熒光檢測不同的是，發(fā)光檢測不需要激發(fā)光源，這就使得發(fā)光更敏感，更不容易引起背景噪音。
典型應用：ATP 檢測和雙報告基因檢測

4、發(fā)光共振能量轉移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）：跟 FRET 類似的檢測原理，不同的是供體產生生物發(fā)光來激發(fā)受體熒光分子，可以用來進行細胞內的分子互作分析。

5、時間分辨熒光（Time-resolved fluorescence ，TRF）：
是一種高級熒光檢測，使用鑭系金屬（常用稀土元素：銪 Eu 和鋱 Tb）做熒光標記，這種稀土元素的特點是：被激發(fā)后熒光壽命很長，不會馬上猝滅。利用這種特性，就可以在激發(fā)后延遲檢測，使得檢測信號不受激發(fā)光和背景熒光的干擾，是一種極其敏感的檢測方法。
這種方法常常與能量共振轉移（FRET）聯(lián)合使用，也就是大家熟知的 HTRF 技術（勻相時間分辨熒光），用于大分子相互作用檢測，靈敏度高、特異性好。

6、熒光偏振（Fluorescence polarization，FP）：
也是一種高級熒光檢測模式，需要酶標儀產生的激發(fā)光光波能夠在一個方向上振蕩，熒光標記在小分子上，通過競爭性結合來檢測大分子和小分子相互作用，了解熒光偏振技術詳細實驗方案。

7、Alpha: 
AlphaScreen® 和 AlphaLISA® 是以微珠為基礎的勻相發(fā)光能量轉移技術。供體微珠和受體微珠可以通過各種各樣的生物分子結合在一起——只要他們結合在一起，供體微珠被 680nm 光源激發(fā)后會發(fā)生一系列的化學反應產生一個放大的信號，并擴散到受體微珠，使受體微珠產生一個發(fā)射光。常用于檢測大分子相互作用。AlphaPlex™ 是 AlphaScreen® 的變體,可以促進多達三種分析物的量化。

多功能酶標儀的應用概覽