上海迪圖談四種常見PCR儀的區(qū)別

更新時間：2023-06-04

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普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀、熒光定量PCR儀的區(qū)別及運用

PCR：即合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)，利用DNA在體外95℃時解旋（變性），55℃時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合（退火），再調(diào)溫度至72℃左右，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈（延伸）。

PCR儀實際就是一個溫控設備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進行溫度控制。
根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為：普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR，實時熒光定量PCR儀等幾類

①普通PCR儀
一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統(tǒng)的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。
普通PCR儀主要應用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。

②梯度PCR儀
一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其適合的退火溫度不同，通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增，從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。
梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增，這樣既節(jié)約時間，也節(jié)約成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。梯度PCR儀多應用于科研、教學機構(gòu),檢驗、檢疫等。
如:,ABI 9700,ABI Veriti, Bio-Rad T100 PCR儀

③原位PCR儀
PCR是提取細胞或組織中的DNA進行基因擴增反應，而原位PCR是保持細胞或組織的完整性，使PCR反應體系滲透到組織和細胞中，在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA，而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中，更有利于探討靶DNA與細胞之間的關(guān)系。

原位PCR儀,主要應用于：（1）檢測外源性基因片段，提高檢出率，集中在病毒感染的檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；（2）觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律（3）內(nèi)源性基因片段，如人體的單基病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRNA片段、癌基因片段等。（4）檢測導入基因；（5）遺傳病基因檢測如β－地中海貧血。

④實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設計基礎(chǔ)上增加熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng)，形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同，在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)，得出量化的實時結(jié)果輸出。

熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候，選用單通道；有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物，因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量，需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。

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