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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證基因功能

更新時(shí)間：2023-06-21      瀏覽次數(shù)：648

一、實(shí)驗(yàn)材料： 疾病對(duì)應(yīng)的細(xì)胞系（或者是原代細(xì)胞），預(yù)算充足情況下可以選擇2種細(xì)胞系，暫定為：A和B細(xì)胞
二、實(shí)驗(yàn)方案：敲低兩種細(xì)胞的目的基因1、過表達(dá)兩種細(xì)胞的目的基因1（若是miRNA可以使用mimics、inhibitor）
三、干擾片段篩選：2種細(xì)胞都需要篩選（當(dāng)用mimics和inhibitor時(shí)也需要初步篩選表達(dá)效果）
目的基因1干擾片段篩選：針對(duì)目的基因1設(shè)計(jì)并合成3條siRNA及NC，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，QPCR篩選出干擾 的片段進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)； 
四、實(shí)驗(yàn)分組：A或B細(xì)胞

  • A

  • A+siRNA NC對(duì)照組

  • A+siRNA目的基因1干擾

  • A+過表達(dá)目標(biāo)基因1 

  • A+過表達(dá)空載

  • 抑制劑處理濃度1

五、檢測項(xiàng)目：

  • 細(xì)胞增殖或者細(xì)胞毒性檢測（CCK法/MMT），

  • 流式檢測細(xì)胞周期，

  • 流式檢測細(xì)胞凋亡，

  • 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（transwell），遷移、劃痕

  • WB檢測細(xì)胞信號(hào)通路中蛋白的表達(dá)變化，

  • QPCR檢測信號(hào)通路中基因的表達(dá)， 

  • 免疫熒光檢測下游信號(hào)通路蛋白

  • 流式多色檢測某些marker指標(biāo)

  • Coip檢測A和B蛋白是否結(jié)合

  • 雙熒光素酶檢測A和B是否結(jié)合

  • 油紅O染色

  • 生化檢測：SOD，CAT等

  • 透射電鏡

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