基于熒光的檢測(cè)方法在生命科學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。市面上有多種試劑盒和試劑可用于熒光酶標(biāo)儀所涵蓋的各種檢測(cè)類型。

常見熒光檢測(cè)應(yīng)用包括DNA/RNA定量、鈣測(cè)定、酶活性、基因表達(dá)、GPCR的第二信使信號(hào)、細(xì)胞凋亡測(cè)定、細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性等。

如果您正在選購一臺(tái)熒光酶標(biāo)儀，各種規(guī)格、選項(xiàng)和功能也許會(huì)讓您挑花了眼。為此，我們總結(jié)了7個(gè)最重要的關(guān)注點(diǎn)，讓我們?yōu)槟灰坏纴怼?/p>

1/靈敏度

毋庸置疑，靈敏度更高的酶標(biāo)儀能夠提供更好的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)結(jié)果，重復(fù)樣本之間的差異更小，有反應(yīng)和無反應(yīng)樣本之間的距離（assay window）更大。更高的靈敏度還有助于減少試劑和樣品的用量，使檢測(cè)更加精簡的同時(shí)，生成高質(zhì)量的結(jié)果。這將有效降低每個(gè)樣品的檢測(cè)成本

2/動(dòng)態(tài)范圍

在熒光強(qiáng)度檢測(cè)中，樣品的濃度范圍通常較大。在熒光酶標(biāo)儀上測(cè)量的信號(hào)可能會(huì)跨越從極弱到強(qiáng)的范圍。還有，基于酶或細(xì)胞動(dòng)力學(xué)檢測(cè)的樣品通常很難預(yù)測(cè)其信號(hào)強(qiáng)度，因?yàn)樵趧?dòng)力學(xué)檢測(cè)過程中，最大信號(hào)會(huì)隨著時(shí)間而累積。

在這些情況下，可能很難在一次測(cè)量中用一種設(shè)置獲取所有樣品的信號(hào)。信號(hào)強(qiáng)度高的樣品可能會(huì)使酶標(biāo)儀的熒光檢測(cè)器飽和；信號(hào)強(qiáng)度低的樣品可能無法與空白樣品區(qū)分開來。

如果熒光酶標(biāo)儀支持較大的動(dòng)態(tài)范圍，可在單次運(yùn)行中讀取差異很大的樣品，避免試出正確的稀釋倍數(shù)和熒光增益比率所造成的試劑和時(shí)間浪費(fèi)。BMG LABTECH的 CLARIOstar® Plus和VANTAstar® 酶標(biāo)儀配備的動(dòng)態(tài)范圍擴(kuò)展技術(shù)(EDR)提供具有競爭力的動(dòng)態(tài)范圍（8個(gè)數(shù)量級(jí)濃度），可在單次運(yùn)行中自動(dòng)測(cè)量極弱和強(qiáng)的信號(hào)，無需進(jìn)行調(diào)節(jié)。

3/波長選擇

激發(fā)和發(fā)射波長是任何熒光檢測(cè)的必要參數(shù)。選擇合適的波長可降低通常由樣品和微孔板的光散射或自發(fā)熒光引起的非特異性背景或干擾。

4/兼容的微孔板規(guī)格

在生命科學(xué)研究中，進(jìn)行基礎(chǔ)的熒光測(cè)定一般使用黑色96孔微孔板。但如果您有多種樣品，并希望節(jié)約寶貴的試劑或時(shí)間，也可以使用384孔和1536孔板。只需確保您選擇的熒光酶標(biāo)儀也能兼容您計(jì)劃使用的微孔板規(guī)格。還有一點(diǎn)，吸光、熒光和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)需要不同顏色的微孔板，分別為透明、黑色和白色

5/試劑注入裝置

在選購熒光酶標(biāo)儀時(shí)，還應(yīng)考慮分析應(yīng)用的性質(zhì)。對(duì)于酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè)或基于細(xì)胞實(shí)時(shí)反應(yīng)的檢測(cè)，試劑注入器能派上大用場(chǎng)。手動(dòng)將試劑移入孔中有可能導(dǎo)致反應(yīng)的重要數(shù)據(jù)丟失。特別是對(duì)于一些快速反應(yīng)，可能還沒來得及檢測(cè)，您所尋找的信號(hào)就已經(jīng)消失了。我們的熒光酶標(biāo)儀配備了試劑注入器，注射和信號(hào)檢測(cè)同時(shí)在一個(gè)孔中進(jìn)行，然后在下一個(gè)孔繼續(xù)進(jìn)行（圖 5）。這樣一來，即使是快速反應(yīng)，您也不會(huì)錯(cuò)過任何數(shù)據(jù)點(diǎn)。

6/環(huán)境控制

如果您需要進(jìn)行基于活細(xì)胞的測(cè)定，又想避免在熒光酶標(biāo)儀和培養(yǎng)箱之間來回移動(dòng)微孔板，請(qǐng)確保您選擇的酶標(biāo)儀具有控制其內(nèi)部氣體環(huán)境和溫度的功能。

BMG LABTECH酶標(biāo)儀可集成大氣控制單元（ACU，圖 6）。ACU可獨(dú)立調(diào)節(jié)酶標(biāo)儀倉內(nèi)的氧氣和二氧化碳含量，為活細(xì)胞檢測(cè)應(yīng)用提供理想的環(huán)境。與振蕩和恒溫孵育功能相結(jié)合，ACU為基于細(xì)胞的檢測(cè)（從標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長到缺氧檢測(cè)等）提供了真正不用操心的“甩手"解決方案。

7/數(shù)據(jù)分析軟件

酶標(biāo)儀的軟件是容易被低估的選購要點(diǎn)。有些酶標(biāo)儀軟件只能控制測(cè)定過程并提供原始檢測(cè)數(shù)據(jù)輸出，也有些軟件可以進(jìn)行復(fù)雜的分析。

一款全面、易用、靈活的軟件是您的得力助手，可簡化檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析過程，使儀器發(fā)揮應(yīng)有的作用。

熒光檢測(cè)中的計(jì)算功能包括自動(dòng)扣除空白，以及根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算濃度、Km和Vmax等酶常數(shù)。

對(duì)于常見的測(cè)定應(yīng)用，BMG LABTECH軟件包提供預(yù)設(shè)的快速測(cè)定專用方案和專用分析模板。通過這些專用解決方案，只需單擊鼠標(biāo)即可采集和分析數(shù)據(jù)，使研究人員能夠快速、輕松地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（圖 7）。